Исследования в лечении гепатита B

[kotbazilio11]

[quote="rodon"]CLEARANCE HBsAg = Клиренс HBsAg (HBsAg "не обнаружено"), излечение от HBV

вроде Клиренс HBsAg – очищение крови от HBsAg

[MapaT]

Отрывок из работы 2015-го года Мамоновой Нины Алексеевны. Наверное не столь актуально, но все же

Излечим ли хронический гепатит В? Противовирусное лечение сегодня и в будущем.

Аналоги нуклеоз(т)идов эффективно подавляют репликацию HBV ДНК, но:

-мало влияют на уровень HBsAg и сссDNA
-требуется длительное, возможно пожизненное лечение (вопросы безопасности?)

Длительность лечения ИФН известна, но:

-эффективность не высока
-применение ограничено
-выраженные побочные явления


Конечные точки долгосрочной терапии ХГВ:

Одинаковы для HBe - позитивных и HBe - негативных пациентов

*Сегодня
- ДНК HBV не определяется в крови, потеря HBsAg (редко)
- Сниженный риск ГЦК
- Уменьшение случаев необходимости в трансплантации
- Снижение частоты летальных исходов, связанных с HBV

*В будущем
- Потеря HBsAg у всех пациентов
- Исчезновение сссDNA из гепатоцитов
- "Функциональное выздоровление" >> Излечение

Частота достижения сероконверсии по HBsag

Риск возникновения ГЦК

Почему необходим конечный срок лечения

[MapaT]

Стратегии по увеличению частоты потери HBsAg

Энтекавир и Тенофовир в сочетании с ПЕГ-ИФН (Исследование Ares)

Динамика уровней HBsAg на фоне лечения TDF и ПЕГ-ИФН

[MapaT]

Далее идет описание принципов действия и исследований Мирклюдекс В, Тенофовира Алафенамида, Интферона лямбда (выбыл) и другие. Можно почитать по ссылке ниже:
http://www.cmd-online.ru/seminars/3-Mamonova.pdf (собственно сам источник)

[MapaT]

Спасибо were, за предоставленную ссылку на исследование

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5360708/

Перевод некоторой части статьи (+русификация 2 графиков), об исследовании CRISPR-Cas9, продукта генной инженерии, который in vitro и in vivo позволяет удалять фрагмент HBV cccDNA из генома живой клетки

[Cтатья сложная, полна медицинских и научных терминов, постараюсь выделить ключевые моменты. Отмечу так же, что перевод является вольным, за 100% точность не ручаюсь. ]

[От себя добавлю: эксперементы с уничтожением генетического материала HBV (сссDNA) из генома клетки хозяина в данный момент исследуется in vivo и in vitro - т.е в пробирках, с использованием живых клеток организма ]


Удаление встроенной ДНК вируса гепатита B с использованием CRISPR-Cas9

Наличие ковалентно замкнутой кольцевой ДНК вируса гепатита B (cccDNA) и постоянная интеграция ДНК HBV в геном клетки хозяина дает риск реактивации вируса и гепатоцеллюлярной карциномы. У нуклеозидных / нуклеотидных аналогов практически нет способности уничтожать репликативные HBV-шаблоны, состоящие из cccDNA или интегрированной ДНК HBV. Недавно технология CRISPR / Cas9 применялась в качестве перспективного инструмента для редактирования генома, и было показано, что системы CRISPR-Cas9, специфичные для HBV, эффективно опосредуют разрушение ccсDNA. Однако интегрированные фрагменты ДНК HBV обладают проонкогенными свойствами и служат важным шаблоном для репликации вируса и экспрессии устойчивой клеточной линии HBV. В этом исследовании мы полностью удалили полноразмерный интегрированный фрагмент ДНК HBV 3,175 п.н. и разрушили cccDNA в стабильной клеточной структуре HBV. В редактированной клеточной линии, без cccDNA внутри клетки, ДНК HBV, HBsAg и HBeAg оставался ниже границы определения более чем 10 месяцев. Кроме того, путем полного секвенирования генома, мы анализировали эффекты вне целевого диапазона и исключили инфицирование клеток. Впервые инфекция ВГВ была полностью искоренена в устойчивой клеточной линии ВГВ. Эти результаты показывают, что система CRISPR-Cas9 является потенциально мощным средством, способным радикально бороться с ВГВ.

Введение

Хронический гепатит B является одной из основных проблем общественного здравоохранения во всем мире, сейчас насчитывается около 350-400 миллионов носителей вируса HBV (вирус гепатита B) (Seo and Yano, 2014). Инфекция ВГВ приводит к 0,5-1 миллионам смертей в год из-за цирроза печени, гепатоцеллюлярной карциномы и печеночной недостаточности (Kao and Chen, 2002; Roberts and Gores, 2005). Ковалентно замкнутая кольцевая ДНК HBV (cccDNA) очень стабильна у пациентов с ХГБ и служит матрицей для вирусной мРНК и синтеза догеномной РНК (Moraleda et al., 1997; Dandri et al., 2000; Gish et al., 2015; Го и Го, 2015 год, Нассал, 2015 год). Интеграция ДНК HBV в геном клетки хозяина может вызвать изменения генома хозяина, приводя к изменениям в генах, связанных с пролиферацией, дифференцировкой и выживанию клеток (Bonilla Guerrero and Roberts, 2005; Feitelson and Lee, 2007; Jiang S. et al. ., 2012; Jiang Z. et al., 2012; Sung et al., 2012; Xu et al., 2014). Интеграция ДНК HBV также является важным фактором в гепатоканцерогенезе (Bréchot, 2004; Sung et al., 2012; Tarocchi et al., 2014; Xu et al., 2014). Современные анти-HBV-разработки с нуклеозидными / нуклеотидными аналогами (NA) или интерфероном не излечивают HBV, и рецидивы встречаются (Bang and Kim, 2014). Хотя АН могут ингибировать обратную транскриптазу вируса и подавлять репликацию HBV, эти препараты сами по себе практически или совсем не обладают способностью элиминировать репликативные HBV-шаблоны, содержащие cccDNA (Moraleda et al., 1997; Dandri et al., 2000) или интегрированную ДНК HBV (Zucman-Rossi И Лоран-Пуиг, 2007). Учитывая недостатки современных терапевтических возможностей, необходимо обратиться к КГБ принципиально иным образом (Shaw et al., 2006; Sharon and Chu, 2008).

Недавно был разработан новый инструмент для редактирования генома CRISPR-Cas9, основанный на кластерных, регулярных, интервальных, коротких палиндромных повторениях бактериальной иммунной системы (CRISPRs) (Qi et al., 2013). В настоящее время изучаются нуклеазы (ZFNs) и нуклеазы транскрипционных активаторных эффекторов (TALENs) в отношении их способности специфически разрушать геномы HBV in vitro и in vivo (Cradick et al., 2010; Bloom et al., 2013; Chen et al. Al., 2014). Однако по сравнению с ZFNs и TALENs система CRISPR / Cas9 может быть легче перепрограммирована и доставлена как in vitro, так и in vivo для расщепления практически любой последовательности ДНК, просто перепроектируя направляющие РНК (gRNAs), которая, как предполагается, является перспективным геномом (Qi et al., 2013; Ran et al., 2013; Zhang et al., 2014). Используя CRISPR-Cas9, Hu et al. Полностью удалили полную длину интегрированной ВИЧ-провирусной ДНК в стабильной моноклональной клеточной линии ВИЧ (Hu et al., 2014). В этих исследованиях HBV-специфичные системы CRISPR-Cas9 эффективно опосредуют разрушение гена в шаблонах HBV в векторах экспрессии (Lin et al., 2014; Liu et al., 2015) и cccDNA HBV (Seeger and Sohn, 2014; Kennedy et al. , 2015; Zhen et al., 2015a) как in vitro, так и in vivo. Однако ни в одном из этих исследований не было показано удаление полноразмерной интегрированной ДНК HBV и субгеномных интегрированных фрагментов ДНК HBV в стабильной клеточной линии HBV (Lin et al., 2014; Seeger and Sohn, 2014; Kennedy et al., 2015; Liu Et al., 2015; Zhen et al., 2015a). Эти недостатки в значительной степени ограничили перспективу разработки фундаментального терапевтического метода вирусной эрадикации через CRISPR-Cas9. В нескольких исследованиях было показано, что удаление интегрированной ДНК HBV из генома хозяина является необходимой мерой для восстановления стабильности хромосомы и лечения HBV (Peng et al., 2015; Ramanan et al., 2015; Wang et al. , 2015). В исследовании Каримова и соавт. Разрушали интегрированную ДНК HBV, используя встроенную репортерную последовательность HBV в клеточных линиях HeLa и HEK293 (Karimova et al., 2015). В HBV-инфицированных клетках возможно существование множества различных форм эписомальной ДНК HBV (Tuttleman et al., 1986) и множественных интегрированных сайтов HBV в разных хромосомах (Matsubara and Tokino, 1990) сделало громоздким усиление полной длины интегрированной ДНК HBV в стабильной клеточной линии HBV, используя Alu- / LM-PCR. Кроме того, ограничения генерируемых секвенированием следующего поколения (NGS), означают, что пул интеграции ДНК HBV может быть выведен только из парных считываний, содержащих как человеческие, так и вирусные последовательности (Hai et al., 2014). В предыдущем исследовании мы установили стабильную линию клеток HBV, HepG2.A64 (CCTCC C 201163), используя штаммы генотипа C HBV (GenBank: HQ638218.1), выделенные от пациентов с гепатитом B (Wei-ming et al., 2014). По сравнению с HepG2.2.15, эта клеточная линия может производить больше антигенов, вирионов и HBV cccDNA, ее легче культивировать и трансфектировать. HBV, в клетках HepG2.A64, содержал устойчивые к entecavir мутации, которые уже были использованы в исследованиях устойчивости к лекарственным средствам (Liu et al., 2016). Более того, мы использовали CRISPR-Cas9 для разрушения cccDNA HBV и ингибирования репликации вируса в этой клеточной линии в нашем предыдущем исследовании (Li et al., 2016). В этом исследовании, мы удалили полную длину интегрированной ДНК HBV (а не только HBV cccDNA), что означает, что мы добились ликвидации инфекции HBV в этой стабильной клеточной линии HBV.


Результаты

Анализ интегрированной ДНК HBV и обоснование выбора CRISPR-Cas9

Мы использовали стабильную клеточную линию HBV HepG2.A64 (CCTCC C 201163, далее именуемую «A64») в качестве клеточной модели. Полная длина интегрированной ДНК HBV в этой клеточной линии зависела от чужеродного промотора (промотор β-актина) вместо вирусных промоторов, что позволило амплифицировать (увеличить) полноразмерную реплицируемую интегрированную ДНК HBV с использованием специфического праймера ( P1), расположенного в чужой промоторной области (фиг.1А). Для обеспечения того, чтобы продукты ПЦР праймеров (Р1 и Р2) были интегрированы ДНК HBV, а не фрагментом на pTriexHBV1.1, для извлечения круговой дуплексной ДНК использовали безопасную АТФ-зависимую ДНКазу (PSAD). HBV-специфичные праймеры (HBSF & R) и геномно-специфичные праймеры (A1ATF & R) использовали в качестве положительного и отрицательного контроля, соответственно, для оценки влияния круговой дуплексной ДНК на экстракцию. Праймер Р1 и ген-специфический праймер Р3 HBV S не амплифицировали круговую дуплексную ДНК (фиг.1С, D), что указывает на отсутствие циркулярного pTriexHBV1.1 в стабильной линии клеток A64 HBV и что праймер Р1 представляет собой интегрированный HBV ДНК-специфический праймер. Затем мы проводили ПЦР на больших расстояниях, используя геномную ДНК A64 со встроенными ДНК-специфичными праймерами HBV (Р1 и Р2) с Phusion High-Fidelity PCR Kit (NEB, US), следуя протоколу производителя. Секвенирование продуктов ПЦР выявило ДНК-фрагмент размером 4049 п.о., представляющий собой интегрированную ДНК HBV (сссDNA) 3,362 п.о. (1,1 экз.), Плюс фланкирующую последовательность pTriexHBV1.1, содержащую 687 п.о. (фигура 1В). Интегрированная ДНК HBV с 3,362 п.н. содержала полный геном HBV 3,173 п.н. и повторную последовательность 189 п.н. области ядра HBV. Чтобы удалить полноразмерную интегрированную ДНК HBV, мы использовали одну gRNA, нацеленную на две повторные области интегрированной ДНК HBV, которая должна была быть более эффективной при трансфекции и иметь более низкий целевой потенциал, чем использование двух gRNAs (Рисунок 1A ). По онлайн-прогнозу эффективности (Hsu et al., 2013; Mali et al., 2013) мы идентифицировали пять мишеней gRNA с меньшим количеством побочных эффектов на геном хозяина (таблица S2) и построили соответствующие системы для направленного действия CRISPR-Cas9.

Специфическая инактивация репликации HBV с помощью CRISPR-Cas9

Для оценки способности генерировать видимое расщепление на обоих концах интегрированной ДНК HBV мы провели анализ чувствительности к Tin эндонуклеазе I (T7EI) T7 (Ran et al., 2013) после трансфекции пяти gRNAs в клеточную линию A64 (рис. 2A). Все системы вводили двухнитевые разрывы (DSB) на оба конца интегрированной ДНК HBV, но gRNA-69 была наиболее эффективной системой(Рисунок_2А). Затем, чтобы определить эффективность gRNAs в клетках A64, мы использовали набор реактивов ARCHITECT HBsAg и HBeAg для определения количества HBeAg и HBsAg в супернатантах клеточной культуры через 16 последовательных дней после трансфекции. На 9-й день после трансфекции, по сравнению с таковой в пустой группе gRNA, концентрации HBeAg снижались в группе, обработанной gRNA-91, 83,13 ± 0,14%, в группе, обработанной gRNA-69, 80,53 ± 2,43%, 70,71 ± 2,09% В группе, обработанной gRNA-62, и 76,50 ± 0,27% в группе, обработанной gRNA-60. Концентрации HBsAg снижались 87,38 ± 1,56% в группе, обработанной gRNA-91, 86,49 ± 1,79% в группе, обработанной gRNA-69, 80,07 ± 1,01% в группе, обработанной gRNA-62, и 82,55 ± 0,78% в группе GRNA-60-обработанная группа. Концентрации ДНК HBV были снижены на 91,72 ± 1,55% в группе, обработанной gRNA-91, 89,21 ± 2,72% в группе, обработанной gRNA-69, 80,30 ± 1,30% в группе, обработанной gRNA-62, и 86,95 ± 1,93%.
Следует отметить, что подавление HBsAg и ДНК HBV было несколько выше, чем подавление HBeAg. В течение 16 последовательных дней после трансфекции концентрации HBV ДНК, HBeAg и HBsAg в супернатантах культуры были низкими в группах gRNA-91, gRNA-69, gRNA-62 и gRNA-60 (фиг.2B, D) по сравнению с таковыми в GRNA-empty (рисунок 2C). Ни ДНК HBV, ни антигены HBV не были снижены в клетках, трансфецированных gRNA-65. Более того, на 10 и 14 день после трансфекции, вся группа продемонстрировала снижение подавления HBeAg и ДНК HBV. Это явление было ожидаемо из-за потерь клеток при смене среды.

Препарат CRISPR-Cas9 удалил полноразмерный интегрированный геном HBV и разрушил cccDNA HBV

Мы ожидали, что экспрессия gRNAs в клетках A64 приведет к уничтожению всего генома HBV 3,173 bp между мишенями A и B. По результатам ПЦР-анализа на больших расстояниях мы обнаружили один субклон HepG2.A64-69-7 (A64, трансфецированный gRNA-69, далее именуемый «69-7»), который содержал полную делецию (уничтоженный геном HBV) интегрированного 3,173 п.о. Геном HBV (фиг.3А). 873-п.о. фрагмент, представляющий предсказанный сегмент, полученный в результате его фланкирующей области, был амплифицирован ,предполагая, что gRNA-69 позволил Cas9 удалить полноразмерный интегрированный сегмент генома HBV. Анализ последовательностей показал, что 873-п.о. фрагмент включал 687-bp из интегрированной pTriexHBV1.1-фланкирующей последовательности и 186-bp повторной области ядра HBV с делецией 3-bp на участке-мишени gRNA-69, который и был ожидаемым результатом от расщепления и восстановления с помощью gRNA-69.

Смотреть видео

Смотреть видео

[Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5360708 ]

[Interstellar1]

Эх, читаешь, смотришь такие материалы и одновременно и радостно, и грустно становится

Почему грустно

Где-то происходит торжество науки и человеческого энтузиазма, а где-то торжествует только бесконечный распил бабла, которое в скоромных количествах выделяется на науку.

[Water]

Пусть хоть где-то идут. Потом в США это бцдет стоить сто тыщ миллионов, вытряхиваемых со страховок, а индия и китай склонируют для всего остального мира.

[MapaT]

New Therapies for Chronic Hepatitis B

Maya Bitton Alaluf; Amir Shlomai

DISCLOSURES

Liver International. 2016;36(6):775-782
http://www.medscape.com/viewarticle/864062_1 (для просмотра требуется регистрация)

Обзор будущих стратегий лечения HBV (по мнению авторов)

Выделены ключевые моменты на мой взгляд.

*Из обзора я убрал описание разработок Мирклюдекс и CRISP CASP9, т.к эти работы уже были описаны на форуме*

{Старался максимально адаптировать переведенный текст, надеюсь, что у меня получилось. Совсем без терминологии не получится. Кому надо - тот поймет }

Если нужно, могу предоставить источники отдельных исследований, которые указаны в тексте - [1]-[82]



Введение

Около 350 миллионов человек во всем мире инфицированы вирусом гепатита B (HBV), что представляет собой серьезную проблему общественного здравоохранения. Аналоги Nucleos / tide (NUC, АН) и интерферон альфа (IFNα), являются текущим стандартом лечения хронической инфекции, они направлены на предотвращение прогрессирования заболевания до цирроза, гепатоцеллюлярной карциномы (HCC) и смерти. Однако, в отличие от гепатита С, при котором котором новые противовирусные лекарственные средства излечивают подавляющее большинство пациентов, в отношении HBV добиться излечения не удается из-за необычной стойкости вирусной ДНК в виде ковалентно замкнутой кольцевой ДНК (сccDNA) в ядре инфицированных клеток. Доступные методы лечения HBV требуют пожизненного лечения и наблюдения, поскольку повторная активация часто возникает после прекращения приема противовирусных препаратов, риск возникновения ГЦК значительно снижается, но не устраняется полностью даже после многих лет успешного подавления вируса. Прогресс был достигнут в разработке новых терапевтических средств, и вполне вероятно, что только комбинация иммунных модуляторов, ингибиторов экспрессии генов, репликации и препаратов, нацеленных на cccDNA, уничтожит хроническую инфекцию. Этот обзор призван обобщить современное состояние исследований препаратов HBV, в котором подчеркиваются те агенты, которые обладают наибольшим потенциалом для успеха на основе in vitro и данных о клинических исследований.

На сегодняшний день существует два основных класса противовирусных препаратов для HBV; Иммуномодуляторный агент интерферон альфа (IFNα) и аналоги нуклеозидов (тидов) (NUC). [6,7] Текущая терапия подавляет репликацию вируса, что приводит к нормализации сывороточной аланиновой трансаминазы (ALT) и улучшению гистологии печени. [8,9]

IFN имеет множество механизмов действия, включая противовирусные, антипролиферативные и иммуномодулирующие эффекты. Важно отметить, что лечение IFNα дает возможность для определения конечной точки лечения и потерю поверхностного антигена HBV (HBsAg) по сравнению с терапией NUC. [10,11] Однако его использование значительно ограничено изза возникновения нежелательных явлений.

С другой стороны, NUC ингибируют активность вирусной полимеразы / обратной транскриптазы, что является обязательным условием для репликации HBV. Их основным недостатком является необходимость длительного и часто непрерывного лечения из-за их ограниченного влияния на пул вирусной ДНК (cccDNA).

Комбинированная терапия с IFNα и NUC может иметь синергетический эффект, что приводит к лучшему контролю над вирусом, по крайней мере теоретически. Более ранние исследования не продемонстрировали существенной разницы в основных результатах лечения с такой комбинацией [12], хотя более поздние исследования, использующие стратегию последовательной терапии (то есть Peg-IFNα, добавленную к NUC нового поколения), обещают лучшие результаты. [13]

HBV представляет собой ДНК-содержащий вирус, который реплицируется через промежуточное соединение РНК. Вирусный геном состоит из небольшой двухцепочечной кольцевой ДНК (rcDNA), которая транслоцируется в ядро, где она превращается в cccDNA, которая сохраняется в виде минихромосомы и служит в качестве матрицы для вирусной транскрипции [ 14] Впоследствии можно было предположить, что, как только будет достигнуто подавление вирусной репликации, новые молекулы cccDNA не будут воспроизводится, и после нескольких циклов деления клеток и естественной смерти гепатоцитов все инфицированные клетки исчезнут. Однако, пул молекул cccDNA остается очень стабильным, поскольку вирусная ДНК сохраняется даже после многих лет лечения NUC. [15]

Все это имеет очень яркий контраст с вирусом гепатита C, РНК – содержащим вирусом, который может быть эффективно устранен с помощью современных противовирусных агентов (DAA), что приводит к полному излечению среди более чем 95% пациентов, получивших лечение.

Учитывая высокую эффективность, безопасность и превосходный профиль устойчивости к мутациям новых NUC, некоторые ученые утверждают, что лечение HBV не должно стремиться дальше. ( ) Тем не менее, учитывая низкий процент пациентов, получающих функциональное излечение от текущих лекарств (только 5-6% пациентов, получавших новые NUC в течение 3 лет, достигнут потери HBsAg) [16,17], подавляющее большинство пациентов должны продолжать терапию NUC неограниченно долго. Это создает риск появления мутаций и подверженности пациентов потенциальным долгосрочным побочным эффектам. Более того, даже длительное подавление вируса с помощью NUC значительно уменьшает, но не исключает риск ГЦК[5]. Соответственно, существует много разработок методов лечения, но неясно, какая основная цель терапии должна быть поставлена;
Тогда как функциональное излечение, определяемое как потеря HBsAg, представляется реалистичной целью, вирусологическое выздоровление, определяемое как полное очищение вируса и его генома из инфицированных клеток, представляется труднодостижимой задачей. Учитывая, что лечение IFNα может существенно снизить уровни cccDNA [18], и, как было показано, различие cccDNA с нецитопатическими механизмами происходит естественным образом у шимпанзе, инфицированными острой инфекцией HBV [19], теоретически возможно полное разрешение инфекции. Этот обзор присоединяется к другим недавним публикациям [20,21], в которых приводится обзор и перспективы в отношении основных событий в исследованиях HBV, в которых основное внимание уделяется cccDNA, как основной мишени терапии.



Новые методы лечения хронического гепатита В

Взаимодействие с жизненным циклом вируса и распространением

Интерференция РНК (RNAi)

Метод интерференции РНК (RNAi) позволяет создавать короткие интерферирующие РНК (siRNAs), комплементарные целевым мРНК вируса, что приводит к их деградации [22]. В результате перекрывающегося характера генома HBV одна siRNA может сбивать всю последовательность мРНК HBV, делая HBV идеальной мишенью для терапии на основе RNAi [23-25]. Кроме того, поскольку избыток секретируемого HBsAg (пустых оболочек) действует на иммунитет как приманка, по принципу ложных целей, «сбивание» HBsAg с использованием RNAi может привести к изменению иммунной толерантности – активации клеточного иммунитета. После обнадеживающих результатов по экспериментам, проведенных на шимпанзе [26], было проведено рандомизированное двойное слепое плацебо-контрольное исследование фазы II синтетического поликонъюгированного анти-HBV-siRNA-соединения, ARC-520 © (исследовательская корпорация Arrowhead). Это исследование состояло из хронически отрицательных HBeAg пациентов, которые находились на лечении энтекавиром. Единая доза АРК-520 привела к значительному уменьшению (до 50%) уровня HBsAg, который поддерживался на протяжении 43 дней после лечения [27]. Дальнейшие исследования должны уточнить, является ли наблюдаемое снижение HBsAg также результатом восстановления противовирусного иммунного ответа и лучшего контроля над вирусом и пулом cccDNA. Кроме того, одной из основных проблем, связанных с клиническим применением RNAi, является его высокая специфичность для печени. Примером такой технологии может служить разработка специальной системы доставки, основанной на гепатоцитарно-направленном эндосомно-высвобождающем агенте и конъюгированной с холестерином siRNA (chol-siRNA) [28] в качестве основы для соединения и доставки ARC-520 © в гепатоциты.


Ингибиторы сборки нуклеокапсида

Вирусный капсид и его основной белок, играют важную роль в жизненном цикле вируса, а также в поддержании cccDNA [29]. Гетероарилдигидропиримидины (HAP) являются мощными ингибиторами сборки капсида, а прототипное соединение BAY 41-4109 широко изучено в различных моделях HBV. [30,31] BAY 41-4109 предположительно ингибирует инкапсулирование и уменьшает период полураспада основного белка HBV.

Другое соединение, NVR 3-778, связывается с основным белком и способствует образованию аномальных-дефектных капсидов. Было показано, что это соединение ингибирует репликацию HBV в клеточной линии HepG2.2.15 и совсем недавно в моделях гуманизированной мыши uPA-SCID. [32,33] Исследование безопасности фазы Ia подтвердило его безопасность у здоровых людей при однократном введении [34]. ] Недавно была представлена кристаллическая структура ингибитора капсулирования NVR-010-001-E2, связанная с белком ядра [35]. Эта важная работа позволяет лучше понять естественных вирусных мутантов, устойчивых к этому классу лекарств, и предоставляет важную информацию для будущего структурного проектирования более эффективных антикапсидных соединений.


Ингибиторы рибонуклеазы H (RNaseH)

RNaseH необходим для репликации HBV и, следовательно, является потенциальной мишенью для анти-HBV-терапии см. [36].

Изучение сложных классов типичных для вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) с РНКазой H привели к идентификации ингибиторов HBV RNaseH, которые в настоящее время начинают тестироваться на животных инфицированных HBV. Будущую роль ингибиторов RNaseH и получение лучшего контроля над вирусом еще предстоит определить.


Модуляция иммунной системы

Сохранение HBV и поддержание стабильности cccDNA главным образом обусловлены недостаточным иммунным ответом против вируса [44]. Эффективный контроль вирусной инфекции требует эффективной работы как врожденных, так и адаптивных иммунных реакций. Предыдущие исследования предполагают, что HBV является невидимым для иммунитета вирусом, который лишь слабо индуцирует врожденный иммунный ответ, тем самым избегая распознавания. [45,46] Конъюнктивно HBV ассоциируется со слабой или даже отсутствующей вирус-специфичной реакцией Т-клеток, что в значительной степени объясняется состоянием истощения Т-клеток, характеризующимся плохой цитотоксической активностью, нарушением производства цитокинов и экспрессией ингибиторных рецепторов и естественных интерферонов [см. [47]]. Таким образом, возможность стимуляции врожденного иммунного ответа против инфекции HBV и восстановление антивирусной функции истощенных Т-клеток являются важными областями исследований [рассмотренными в [48]].


Ориентация на внутреннюю иммунную систему

Агонисты TLR7.

Врожденный иммунный ответ активируется системой наблюдения хозяина через рецепторы распознавания возбудителя (PRR), такие как сходные рецепторы (TLR). TLR-7 в основном распознает вирусные одноцепочечные РНК. При связывании TLR-7 индуцируется каскад образования интерферонов и других цитокинов / хемокинов, стимулируя как клетки естественных киллеров (NK), так и цитотоксические Т-лимфоциты, следовательно, одновременно активируя врожденные и адаптивные иммунные ответы [49].

В недавнем исследовании, проведенном на животных моделях, короткая продолжительность лечения с агонистом TLR7 GS-9620 привела к устойчивому противовирусному ответу, включая снижение вирусной ДНК гепатита HBV , РНК HBV, а также в HBV cccDNA и HBV поверхностный антиген (HBsAg). [50] Подмножество животных стали положительными для anti-HBs. Более того, у животных, достигших снижения вирусной нагрузки, наблюдалось снижение риска возникновения ГЦК (только 10% по сравнению с более чем 70% среди группы плацебо). Было проведено двухфазное двойное слепое исследование с GS-9620. [51] Было установлено, что пероральное введение GS-9620 безопасно и хорошо переносится, но после короткого курса терапии не наблюдалось изменения уровней HBsAg или ДНК HBV. Следует отметить, что у подавляющего большинства пациентов не было обнаружено никакого уровня сывороточного IFNα. Дальнейшие исследования с использованием более высоких доз и более длительной терапии, мы надеемся, приведут к лучшим результатам. В настоящее время проводится исследование фазы II, в котором сравнивается комбинация GS-9620 и тенофовира против тенофовира в режиме монотерапии.

STING Агонисты.

Стимулятор генов IFN (STING) представляет собой внутриклеточный «ДНК-датчик», который активируется циклической GMP-AMP-синтазой (cGAS) в ответ на цитозольную ДНК [52]. DMXAA (Vadimezan или ASA404) является агонистом STING, который продуцирует IFN-доминантный цитокиновый ответ типа I, который эффективно подавляет репликацию HBV в культивируемых мышиных гепатоцитах и мышиную модель инфицированную HBV. [53] DMXAA индуцирует более сильную противовирусную активность против HBV по сравнению с агонистами TLR, а также благоприятный ответ цитокинов с менее выражеными воспалительными характеристиками, что может привести к меньшему воспалению и повреждению тканей. В ожидании дальнейших исследований in vivo предположим, что DMXAA подавляет репликацию HBV, вирусную транскрипцию и, возможно, способствует распаду cccDNA. Это может привести к ослаблению истощения Т-клеток, тем самым восстанавливая специфичный для ВГВ Т-клеточный ответ. Поскольку DMXAA был первоначально разработан как агент с противоопухолевой активностью, он уже был оценен в клинических испытаниях II фазы для лечения различных видов рака, при этом имеется значительная информация о безопасности и эффективности. [54,55]



Ориентация на адаптивную иммунную систему

Специфические ответы T- и B-клеток на HBV остаются решающими для элиминации вируса и его пула cccDNA. Адаптивный иммунный ответ может быть нацелен различными способами; Два ведущих подхода включают стимуляцию с помощью терапевтических вакцинаций и блокаду иммунных ингибиторных путей, которые, как считается, ответственны за истощение Т-клеток.


Терапевтические вакцины.

Проводились многочисленные исследования с использованием терапевтических вакцинаций против хронического HBV с использованием различных антигенов или фрагментов ДНК в качестве молекул-мишеней.

Вакцинация рекомбинантным HBsAg, обычно используемая в качестве профилактической вакцины, была протестирована как средство для продвижения противовирусного иммунного ответа среди хронически инфицированных пациентов. Поскольку ошеломляющая вирусная нагрузка может привести к недостаточной иммунной реакции, [56-59]была проведена длительная терапия NUC-ами перед введением вакцины. Как только вирусная нагрузка уменьшается, циркуляция антигенов и вирусных частиц может потенциально вызвать глубокий ответ Т-клеток, тем самым нарушая иммунную толерантность. Несмотря на это, рандомизированное контрольное исследование эффективности вакцины, совместно с терапией NUC, не показало никакого превосходства по сравнению с монотерапией NUC. [60] Так же в недавнем многоцентровом исследовании, проведенном у пациентов с ХГБ, которые прошли длительную терапию NUC, не было никакого преимущества добавления GS-4774 в отношении подавления или потери HBsAg. [62]

Важно иметь в виду, что результат сочетания NUC с терапевтическими вакцинами может в значительной степени различаться между пациентами, которые находятся на длительной терапии NUC и «наивными» пациентами.

ДНК-вакцинация представляет собой еще один подход к восстановлению антивирусного иммунного ответа путем стимуляции антивирусной CD8-T-клетки, а также CD4-Т-клеток и ответов на антитела. Фаза I

Исследование, проведенное у пациентов с HBV после вирусного «прорыва» на терапии ламивудином, показало, что ДНК-вакцина, содержащая малую и среднюю области оболочки HBV, была безопасной и также вызывала иммунологический ответ у значительной части пациентов [63]. Тем не менее, недавнее открытое перспективное исследование фазы I / II для пациентов, которым проводили лечение с помощью нуклеиновых кислот в течение 3 лет и которые не обнаруживали ДНК в течение по меньшей мере года, показало, что пять инъекций IM на основе ДНК-вакцины на поверхности не препятствовали репликации HBV и не восстанавливала иммунный ответ против HBV [64].
Таким образом, хотя терапевтические вакцинации демонстрируют большой успех in vitro и на моделях на животных, клинические испытания пока показывают неутешительные результаты.



Ингибиторы PD-1 / PD-L1.

CD8 T-клетки экспрессируют ингибирующий фактор, обозначенный как запрограммированная клеточная смерть-1 (PD-1), который функционирует как отрицательный регулятор иммунной системы [65] и, как считается, играет критическую роль в истощении Т-клеток. [66] Ex vivo Исследования показали, что уровень CD8 + T-клеточного ответа обратно коррелирует с уровнем виремии HBV (можно сделать вывод, что само наличие вирусной нагрузки может подавлять иммунитет). HBV-специфичные CD8 + T-клетки экспрессируют высокие уровни PD-1 и препятствуют взаимодействию PD-1 с его природным лигандом, что приводит к улучшению функции Т-клеток [67]. Интересно, что противовирусная терапия с помощью NUC значительно уменьшает экспрессию PD-1, тем самым повышая иммунитет против HBV [68]. Это открытие привело к испытаниям, объединяющим NUC с ингибиторами PD-1 и терапевтической вакцинацией, до сих пор давая обнадеживающие результаты. Совсем недавно исследование, показало, что объединение терапевтической вакцинации и ингибитора PD-L1 при подавлении репликации вируса с помощью NUC привело к усиленной активации Т-клеток в HBV и значительно более устойчивому и устойчивому подавлению обоих, HBV ДНК и HBsAg. [69] Следует отметить, что восстановление цитотоксического ответа Т-клеток несет потенциальную обеспокоенность в связи с массивной гибелью клеток, и поэтому проблемы безопасности необходимо решать до внедрения анти-PD-1-терапию в клинических испытаниях.




Факторы хозяина, связанные с биогенезом cccDNA

На сегодняшний день процесс биогенеза cccDNA до конца не понят, но можно предположить, что HBV использует несколько факторов хозяина для биогенеза cccDNA. Они могут служить потенциальными мишенями терапии, ориентированную на cccDNA.


TDP2

RC-ДНК должна быть подвергнута нескольким манипуляциям, чтобы превратиться в cccDNA, очень вероятно, что это взаимодействует с механизмом восстановления ДНК хозяина. Тирозил-ДНК-фосфодиэстераза 2 (TDP2) представляет собой фермент репарации ДНК, который, как было показано, специфически расщепляет связь тирозин-ДНК у уток, инфицированных HBV (DHBV). RC-ДНК, высвобождающую вирусную полимеразу (P-белок) - критический шаг в преобразовании RC -DNA в cccDNA. «Сбивание» TDP2 в клетках человека значительно замедляло превращение RC-ДНК в cccDNA, в то время как экспрессия TDP2 в тех же клетках восстанавливала более быструю кинетику конверсии [70]. Это исследование впервые выявили клеточный фактор, участвующий в биогенезе cccDNA. Следует отметить, что в недавнем исследовании Cui et al. Продемонстрировано, что, хотя и TDP-2 расщепляет связь ДНК тирозил-минус-цепи in vitro, ингибирование гена TDP2 в клетках гепатомы человека не блокировал образование cccDNA [71]. Эти данные показывают, что TDP2 не является абсолютно необходимым для образования cccDNA и ставит под сомнение полезность TDP2 в качестве мишени для элиминации cccDNA.


Малые молекулы, нацеленные на cccDNA

На основе клеточной линии, зависящей исключительно от cccDNA для продуцирования HBV e антигена (HBeAg) (клеточная линия HepDE19), Cai и др.авторы просканировали библиотеку из 85 000 малых молекул, чтобы выявить два замещенных сульфонамида (DSS), способных ингибировать образование и / или поддержание cccDNA в стабильном состоянии. [79] Интересно, что в отличие от NUC эти DSS-соединения блокировали превращение HBV-ДНК в cccDNA, не ингибируя продукцию rcDNA, что приводит к уменьшению уровней как вирусной cccDNA, так и депротеинизированной rcDNA (DP-rcDNA), предшественника cccDNA. [80] Кроме того, DSS оказывало влияние на пул cccDNA без непосредственного влияния на репликацию вирусной ДНК как в моделях HBV, так и в DHBV (утиный HBV,видимо) . Однако следует учитывать, что механизмы, участвующие в образовании и амплификации DHBV, могут не относиться к HBV, как это было предложено в исследованиях, проведенных в клеточной линии HepaRG. [81] Кроме того, система клеточной линии HepDE19 может быть недостаточно специфичной для обнаружения cccDNA, и поэтому результаты следует интерпретировать с осторожностью, пока не будут достаточно изучены более подробно.


Агонисты LTβR

Недавно Lucifora и его коллеги смогли показать, что обработка IFNα приводит к нецитотоксической деградации значительной части пула cccDNA, опосредуемой клеточной деаминазой, обозначенной как APOBEC3A. [82] Важно отметить, что индукция другой дезаминазы из того же семейства, APOBEC3B через активацию рецептора Lymphotoxin β (LTβR) приводит к более устойчивой деградации cccDNA по сравнению с IFNα. Агонисты LTβR были активны при низких дозах, не вызывали никакой токсичности или модификации геномной ДНК. Представляется заманчивым предположить, что это исследование дает правдоподобный механизм цитокинозависимой нецитопатической элиминации cccDNA, в дополнение к созданию захватывающего терапевтического варианта.


Выводы и будущие перспективы

Появление новой противовирусной терапии против HCV, которая, как было показано, устраняет большинство случаев хронического HCV, вызывает энтузиазм у нынешних исследователей.

В этом обзоре мы стремимся кратко обобщить данные о будущей терапии HBV, схематически разделяя их на три элемента - те, которые направлены на конкретные этапы жизненного цикла, распространения вируса, непосредственно направленные на увеличение и восстановление иммунных ответов хозяина и тех, которые специально нацелены на cccDNA.

Хотя большинство агентов показали большие перспективы лишь in vitro (в пробирке), данные клинических исследований, по-видимому, в основном являются преждевременными на данный момент. Вероятно, для преодоления инфекции HBV потребуются более радикальные антивирусные методы, объединяющие приведенные выше компоненты. Очевидно, что последующие шаги клинических испытаний будут увлекательными, но интенсивные усилия, предпринимаемые в этой области, обещают, что лечение этой давней, изнурительной, а иногда и фатальной болезни может быть доступно в будущем.

[Алекс 2]

В настоящее время нет вирусологического лечения хронического гепатита В, но успешная терапия нуклеотидов (t) ide (NA) может подавлять репликацию ДНК вируса гепатита B (HBV) и, в некоторых случаях, приводит к потере HBsAg. Остановка терапии NA часто приводит к вирусному рецидиву, и поэтому обычно требуется длительная терапия. В этом исследовании исследовалась возможность прекратить терапию тенофовиром дизопроксилфумаратом (TDF) у пациентов с отрицательным HBeAg. Методы Нецирротические HBeAg-отрицательные пациенты, получившие TDF в течение ≥4 лет, с подавленной ДНК HBV в течение ≥3,5 лет, были случайным образом назначены либо для остановки (n = 21), либо для продолжения (n = 21) монотерапии TDF. Стандартные лабораторные анализы, включая вирусную нагрузку ДНК HBV, измерения HBsAg и аланинаминотрансферазы (ALT), а также отчеты о неблагоприятных событиях проводились во время лечения и последующего лечения в течение 144 недель. Результаты пациентов, которые прекратили терапию TDF, 62% (n = 13) оставались вне терапии до 14 недели. Медиана HBsAg в этой группе составляла -0,59 log10 МЕ / мл (диапазон -4,49-0,02 log10 МЕ / мл) против 0,21 Log10 МЕ / мл у пациентов, которые продолжали терапию TDF. Четыре пациента (19%) достигли потери HBsAg. Пациенты, останавливающие терапию, имели начальные колебания вирусной нагрузки и ALT; Однако на Неделе 144 43% (n = 9) либо достигали потери HBsAg, либо имели ДНК HBV <2000 МЕ / мл. Не было никаких неожиданных проблем безопасности, связанных с прекращением терапии ТДФ. Выводы. Это контролируемое исследование продемонстрировало потенциал потери HBsAg и / или устойчивого вирусологического ответа у пациентов без цирроза HBeAg-отрицательных пациентов, прекращающих длительную терапию TDF. Номер клинического испытания NCT01320943

[MapaT]

Новая информация от Replicor. http://replicor.com/wp-content/uploads/ ... n-NAPs.pdf

В продолжение прошлого:
viewtopic.php?f=84&t=4207&start=105#p1327569

Обновленные протоколы REPLICOR 2017:


Короткое начало (основные моменты)

Проблема HBsAg

HBsAg является наиболее распространенным циркулирующим вирусным белком в HBV.
Поверхностные вирусные белки производятся из гепатоцитов:
- с активной репликацией HBV (cccDNA)
а также
- из клеток интеграции HBV.
Ингибирование синтеза HBsAg, его экспрессии из cccDNA, а так же из клеток интеграции HBV является необходимым для достижения функционального контроля, сохраняющегося после терапии.

Понимание проблемы интеграции ДНК HBV

Хроническая интеграция ДНК, по видимому, ассоциируется с риском возникновения ГЦК
Интегрированная ДНК HBV продуцирует прегеномную РНК
мРНК, способная продуцировать HBsAg, транскрибируется.
Белки поверхностного антигена могут быть получены изолированно из cccDNA

Как понять вклад интегрированной ДНК HBV в продуцировании HBsAg?

- РНК HBV и HBcrAg являются новыми маркерами, коррелирующими с активностью cccDNA
- Анализ этих маркеров даст представление о HBsAg, полученном из клеток интеграции

Какой уровень снижения HBsAg влияет на установление функционального контроля?


- Сокращение HBsAg на 1 log с помощью IFN не является достоверным предиктором функционального контроля
- Только раннее многоуровневое снижение и HBsAg-клиренс могут предсказывать функциональный контроль с помощью IFN

Агенты, которые могут помочь достичь многократного снижения HBsAg необходимы!
Препаратами подобного типа могут являться - Полимеры нуклиновых кислот (NAPs)

Обновление:

Клиренс HBsAg у HBeAg - позитивных пациентов




Для HBeAg - негативных пациентов:


[img]http://i075.radikal.ru/1710/03/3df895a69fee.jpg[/img]

*





Выводы:

Поверхностные вирусные белки (ПВБ) составляют основную часть циркулирующего HBsAg
- они ингибируют иммунный ответ на инфекцию HBV
- блокируют активность иммунотерапевтических агентов

Большая часть продукции ПВБ, вероятно, является независимой ccc-ДНК-активностью
- Агенты, непосредственно нацеленные на HBsAg, станут критическим компонентом эффективной комбинированной терапии

NAP блокирует сборку и секрецию ПБВ в клетках cccDNA или клетках интеграции ДНК HBV
- Интерферируют с ранее нехарактеризованным, опосредованным аполипопротеином ПБВ-соединением

Достижение HBsAg <1 ME надежно достигается с помощью REP 2139

Для эффективного ответа на иммунотерапию может потребоваться снижение HBsAg до уровней <1 МЕ

Реакция на иммунотерапию c достижением HBsAg <1 МЕ коррелирует с:
- Увеличение производства анти-HBs, сильных, терапевтических вспышек АЛТ
- Увеличение частоты функционального контроля, продолжающегося после терапии.

P.S Большое СПАСИБО Светлане Yugo69 за помощь с отладкой размеров картинок

[XAM]

Типа все норм ? Жить будем ?

[Алекс 2]

ntroduction: В настоящее время нет конкретных схем лечения пациентов с вирусом гепатита D (HDV). Myrcludex B (MyrB) является первым в своем классе ингибитором входа, оказывающим свою антивирусную функцию, блокируя совместно используемый сосудосодержащий таурохолат HCP / HDV рецептора NTCP. В предшествующем исследовании фазы 2a мы показали, что монотерапия с 2 мг MyrB индуцировала снижение РНК HDV> 1log у 6/7 пациентов на этапе w24 и продемонстрировала синергизм с привязкой IFNα. Здесь мы представляем промежуточные результаты клинического испытания фазы 2b на 120 хронически инфицированных HBV / HDV лиц, получающих 2, 5 и 10 мг MyrB ежедневно в комбинации с TDF или TDF. Методы: 120 пациентов с HBeAg-негативными пациентами с хроническим гепатитом D были рандомизированы в четырех группах лечения. Лечение с TDF 245 мг / день началось не менее чем за 12 часов до MyrB. MyrB был администратором s.c. один раз в день при 2 (A), 5 (B) или 10 мг (C) в течение 24 часов, а затем в течение 24 часов, продолжая TDF. Пациенты в группе D получали только TDF. Первичной конечной точкой была отрицательная оценка РНК HDV или уменьшение на ≥2log10; вторичные конечные точки включают нормализацию АЛТ, АЭ, уровни желчных кислот крови и MyrB-антитела. Результаты: Безопасность: MyrB, как правило, хорошо переносится с использованием 118 препаратов, связанных с наркотиками (умеренный n = 90, умеренный n = 25, тяжелый n = 3), главным образом временные реакции на месте инъекции и лабораторные аномалии. Из шести сообщенных САЭ 5 не были связаны с исследуемым препаратом, а 1 - повышение АЛТ во время наблюдения. Два SAE привели к изучению медикаментозного лечения. Эффективность: при w12 уровни РНК HDV снижались во всех группах, получавших MyrB в любой дозе со средним снижением от BL на 1,24 log10 МЕ / мл в A (n = 16), 1,40 log10 IU / мл в B (n = 18 ) и 1,74 log10 МЕ / мл в C (n = 17). Обработанные TDF пациенты (D) не показали снижение РНК HDV сыворотки (0,09 log10 МЕ / мл, n = 17). В то время как у всех пациентов с повышенными уровнями АЛТ в руках MyrB было выраженное снижение уровней ALT (с полной нормализацией в 7/21 (A), 5/21 (B) и 9/22 (C)) такая тенденция не наблюдалась для руки TDF. На уровне w24 HDV уровень РНК в сыворотке крови снижался в B (1,63 log10 IU / мл; n = 7) и C (2,42 log10 IU / мл; n = 10) независимо от ранее нормализованного ALT. Никакого дальнейшего снижения РНК HDV не наблюдалось в D (0,015 log10 МЕ / мл (n = 9)). HBsAg не показал значительных изменений во всех группах. MyrB индуцировал повышение концентрации конъюгированных желчных солей. Вывод: введение MyrB было безопасным и хорошо переносимым даже при дозах, насыщающих NTCP (5 мг и 10 мг). Дозозависимое снижение РНК HDV сопровождалось выраженной тенденцией к нормализации ALT после 12 недель. Как и ожидалось, для ингибитора входа ингибитор HDV уменьшался путем элиминации кинетики у большинства пациентов. Соответственно, можно ожидать негативации HDV при длительной продолжительности лечения.

[Алекс 2]

Справочная информация и цель. Интерферон-альфа-терапия при хронической инфекции гепатита (HDV) является неудовлетворительной. Ингибитор пренализации lonafarnib (LNF) доказал свою активность против HDV в ранних клинических испытаниях. Исследование фазы 2 LOWR HDV-3 со всеохватывающей комбинацией одноразового ритонавира (RTV), усиленного LNF, было сообщено безопасным и переносимым у пациентов в течение 6 месяцев терапии. Здесь мы стремились предоставить информацию о динамике HDV-хозяина и эффективности LNF + RTV с использованием математического моделирования на образцах LOWR HDV-3. Методы: пациенты с HDV были рандомизированы в LOWR HDV-3 в одну из шести групп: LNF 50/75/100 мг + RTV 100 мг один раз в день в течение 24 недель (n = 12) или 12 недель плацебо, а затем LNF 50/75/100 мг + RTV 100 мг один раз в день в течение 12 недель (n = 9). Так как частая вирусная кинетика была доступна только в 24-недельном плече LNF 50/75/100 мг + RTV 100 мг, 12 пациентов в этой группе были включены в анализ моделирования. Всех пациентов лечили аналогами нуклеотида гепатита В. Математическая модель, которая включает пролиферацию гепатоцитов, использовалась для оценки кинетических параметров HDV и эффективности LNF + RTV в блокировании вирусного производства. Результаты. В каждой дозирующей группе были идентифицированы четыре различных вирусных кинетических паттерна: (i) трехфазное снижение, состоящее из первой фазы с быстрым снижением нагрузки на вирус, а затем «фазой плеча», в которой вирусная нагрузка медленно или остается постоянной, и третья фаза возобновления вирусного распада, (ii) плоский частичный ответ (FPR), состоящий из первой фазы с быстрым снижением вирусной нагрузки, за которым следует более низкая уставка вирусной нагрузки), (iii) отскок, в котором FPR или трифаз наблюдались кинетические закономерности с последующим отскоком в вирусной нагрузке (из-за различной эффективности препарата) и (iv) отсутствие ответа (пациенты были исключены из моделирования). Результаты моделирования показывают задержку [медиана t0 = 8.50 (IQR: 16) дней], в которой вирусная нагрузка оставалась на уровне предварительной обработки, и что LNF + RTV имел 95% (IQR: 21%) эффективность в блокировании производства HDV, независимо от дозы LNF. Средний период полувыведения медианных HDV и инфицированных клеток (t1 / 2) оценивался как 1,7 (IQR: 0,03) дня и 1,2 (IQR: 0,94) дней соответственно. Вирусный отскок объясняется снижением эффективности LNF + RTV с ~ 95% до ~ 50% после 28-137 дней после начала терапии. Моделирование предполагает, что лечение (определяемое как менее одного вируса в жидкости внеклеточного тела пациентов) могло быть достигнуто за счет увеличения продолжительности терапии до 51 wk, 54 wk и 94 wk для 3 трифазных ответчиков. Выводы. Результаты моделирования показывают высокую противовирусную эффективность (95%) с LNF + RTV и показывают, что ответная терапия длительной продолжительности может приводить к продолжению анти-HDV-активности и вирусной щели

[MapaT]

Myrcludex B (MyrB)
Lonafarnib

Myrcludex

В настоящее время нет конкретных схем лечения пациентов с вирусом гепатита D (HDV). Myrcludex B (MyrB) является первым в своем классе ингибитором входа, обладающим антивирусным эффектом, блокируя рецепторы входа NTCP для HBV / HDV. В предшествующем исследовании фазы 2a мы показали, что монотерапия с 2 мг MyrB индуцировала снижение РНК HDV> 1log у 6/7 пациентов на этапе 24 недельной терапии и продемонстрировала синергизм с привязкой PEG-IFNα. Здесь мы представляем промежуточные результаты клинического испытания фазы 2b на 120 хронически инфицированных HBV / HDV лиц, получающих 2,5 и 10 мг MyrB ежедневно в комбинации с TDF.

Методы: 120 пациентов с HBeAg-негативным HBV и с хроническим гепатитом D были рандомизированы в четырех группах для лечения. Лечение с TDF 245 мг / день началось не менее чем за 12 часов до MyrB. Введение MyrB было один раз в день в дозировках 2мг (A), 5мг (B) или 10 мг (C) , продолжая прием TDF. Пациенты в группе D получали только TDF. Первичной конечной точкой была отрицательная количественная оценка РНК HDV или уменьшение на ≥2log10; вторичные конечные точки включают нормализацию АЛТ, уровни желчных кислот крови и MyrB-антитела.

Результаты:
Безопасность: MyrB как правило, хорошо переносился у 118 пациентов.
Проблемы, связанные с введением препарата (легкие n = 90, умеренные n = 25, тяжелые n = 3), главным образом это были временные реакции в месте инъекции и лабораторные аномалии. Из сообщенных нежелательных явлениях: 5 не были связаны с исследуемым препаратом, а 1 - повышение АЛТ во время наблюдения. Два случая нежелательных явления привели к доп. изучению медикаментозного лечения.

Эффективность: при 12 недельном наблюдении: уровни РНК HDV снижались во всех группах, получавших MyrB в любой дозе со средним снижением от исходного на 1,24 log10 МЕ / мл в A (n = 16), 1,40 log10 IU / мл в B (n = 18 ) и 1,74 log10 МЕ / мл в C (n = 17). Обработанные TDF пациенты (D) не показали снижение РНК HDV сыворотки (0,09 log10 МЕ / мл, n = 17). В то время как у всех пациентов с повышенными уровнями АЛТ в группе с MyrB было выраженное снижение уровней ALT (с полной нормализацией в 7/21 (A), 5/21 (B) и 9/22 (C), такая тенденция не наблюдалась для групп TDF.

При 24 недельном наблюдении: уровень РНК в сыворотке крови снижался в B (1,63 log10 IU / мл; n = 7) и C (2,42 log10 IU / мл; n = 10) независимо от ранее нормализованного ALT. Никакого снижения РНК HDV не наблюдалось в группе TDF (D) (0,015 log10 МЕ / мл (n = 9)).
HBsAg не показал значительных изменений во всех группах. MyrB индуцировал повышение концентрации конъюгированных желчных кислот.

Вывод: введение MyrB было безопасным и хорошо переносимым даже при дозах (5 мг и 10 мг). Дозозависимое снижение РНК HDV сопровождалось выраженной тенденцией к нормализации ALT после 12 недель. Как и ожидалось, в качестве ингибитора входа, уровни HDV уменьшались путем элиминации кинетики у большинства пациентов. Соответственно, можно ожидать негативизации HDV при длительной продолжительности лечения.

Lonafarnib

Ингибитор пренилирования lonafarnib (LNF) доказал свою активность против HDV в ранних клинических испытаниях.

Исследование фазы 2 LOWR HDV-3 комбинированая терапия ритонавира (RTV) и LNF, была безопасной и хорошо переносимой у пациентов в течение 6 месяцев. Здесь мы стремились предоставить информацию о динамике по HDV и эффективности LNF + RTV с использованием математического моделирования на образцах LOWR HDV-3.

Методы: пациенты с HDV были рандомизированы в LOWR HDV-3 в одну из шести групп: LNF 50/75/100 мг + RTV 100 мг один раз в день в течение 24 недель (n = 12) или 12 недель плацебо, а затем LNF 50/75/100 мг + RTV 100 мг один раз в день в течение 12 недель (n = 9). Так как вирусная кинетика по HDV была доступна только в 24-недельном наблюдении LNF 50/75/100 мг + RTV 100 мг, 12 пациентов из этой группы были включены в анализ моделирования. Всех пациентов лечили аналогами нуклеотидов для HBV. Математическая модель, которая включала и пролиферацию гепатоцитов, использовалась для оценки кинетических параметров HDV и эффективности LNF + RTV в блокировании производства вирусов.

Результаты. В каждой группе были идентифицированы три различных вирусных кинетических паттерна: (i) трехфазное снижение, состоящее из первой фазы с быстрым снижением вирусной нагрузки, затем фаза, в которой вирусная нагрузка медленно снижалась или оставалась неизменной, и третья фаза возобновляла вирусный "распад". (ii)Частичный ответ (FPR), состоящий из первой фазы с быстрым снижением вирусной нагрузки, за которым следует более низкие темпы снижения вирусной нагрузки
(iii) Возврат, в группе, которой имелся частичный ответ наблюдались определённые закономерности с последующим возвратом виремии (из-за различной эффективности препарата) и отсутствие ответа (пациенты были исключены из моделирования).

Результаты моделирования показывают задержку [медиана t0 = 8.50 (IQR: 16 дней], в которой вирусная нагрузка оставалась примерно на одном уровне, и что LNF + RTV имел 95% (IQR: 21%) эффективность в блокировании производства HDV, независимо от дозы. Средний период полувыведения HDV и инфицированных клеток (t1 / 2) оценивался как 1,7 (IQR: 0,03) дня и 1,2 (IQR: 0,94) дней соответственно. Вирусный возврат объясняется снижением эффективности LNF + RTV с ~ 95% до ~ 50% после 28-137 дней после начала терапии.

Моделирование предполагает, что излечение (определяемое как менее 1log10/ml) могло быть достигнуто за счет увеличения продолжительности терапии до 51 недель, 54 недель и 94 недель.

Выводы.
Результаты моделирования показывают высокую противовирусную эффективность (95%) LNF + RTV и указывают на то, что противовирусный ответ при длительной продолжительности терапии может приводить к продолжению блокирования репродукции HDV.

[Алекс 2]

Имеет ли место заболеваемость гепатоцеллюлярной карциномой (HCC) у пациентов с хроническим гепатитом B при длительной терапии с сильными аналогами нуклеотидов (t) в настоящее время неясна. Поэтому мы оценили заболеваемость HCC после 5 лет терапии энтекавиром / тенофовиром (ETV / TDF) и попытались определить возможные факторы, связанные с поздним возникновением HCC. Это европейское, 10 -центровое, когортное исследование включало 1 951 взрослых кавказских пациентов с хроническим гепатитом B без ГЦК на исходном уровне, которые получали ETV / TDF в течение ≥1 года. Из них 1 205 (62%) пациентов без ГЦК в течение первых 5 лет терапии соблюдались в течение 5-10 (медиана, 6,8) года. HCC были диагностированы у 101 / 1,951 (5,2%) пациентов в течение первых 5 лет и 17/1 205 (1,4%) пациентов в течение 5-10 лет. Годовой показатель заболеваемости HCC составлял 1,22% внутри и 0,73% после первых 5 лет (P = 0,050). Годовой показатель заболеваемости HCC не отличался в течение и после первых 5 лет у пациентов без цирроза (0,49% против 0,47%, P = 0,931), но он значительно снизился у пациентов с циррозом (3,22% против 1,57%, P = 0,039) , Все HCC старше 5 лет развивались у пациентов старше 50 лет при начале ETV / TDF. Более ранний возраст, нижние тромбоциты на исходном уровне и 5-й год и жесткость печени ≥12 кПа на 5-й год независимо были связаны с более частым развитием HCC после 5-го года в многопараметрическом анализе. Ни один пациент с низким уровнем тромбоцитов, возрастом, пол-гепатитом В на исходном уровне или 5-й год не развивал HCC. Вывод: риск HCC снижается до 5-го года терапии ETV / TDF у кавказских пациентов с хроническим гепатитом B, особенно у пациентов с компенсированным циррозом; более высокий возраст (особенно ≥50 лет), более низкие тромбоциты и жесткость печени ≥12 кПа на 5-й год представляют основные факторы риска для позднего развития HCC