Что я замерил, сдав анализ на HBV-DNA?

[Сохатый]

Привет, народы!
Сдал недавно в центре очередные анализы в рамках присмотра за инфекцией. Нагрузка в прошлом году 150 ME – сейчас 45 ME. Но не думаю, что это имеет какое-то положительное значение, т.к. в счет обычно идут логарифмические изменения, т.е. порядковые изменения подобных величин. Аминотрансферазы в норме. Фиброз на месте – в общем, мой геп пока дрыхнет.

Привил супругу от гепа. Уже пройден полный цикл прививок. Тут на форуме где-то, помнится, читал, что нормальный иммунитет возникает после 2-й прививки, а третья только закрепляет результат. Так вот по своему опыту, вернее по опыту моей супруги, могу сказать, что это не так. Через месяц после 2-й прививки титры антител были на уровне 60 МЕ., что находится, так скажем, в желтой зоне иммунитета (10-100 МЕ.). Через месяц после 3-й прививки анализы показали 650 МЕ. Теперь я спокоен – иммунитет пребывает в зеленой зоне.

На всякий случай сдал количественный HbsAg в Сити Лаб. Этого анализа нет в стандартном наборе мониторинга нашего центра. Не самый важный показатель, но динамику отслеживать полезно. Так вот результаты анализа меня озадачили. Вместо нормального количественного показателя, как, например, в анализе на вирусную нагрузку, мне выдали результат в виде >250 ME/мл. Т.е. по сути указали нижнюю границу значения (хотя, наверное, более информативна была бы верхняя граница). В общем, такой анализ сложно назвать количественным. Пожалуй, он ближе к качественному. Это нормальная практика? Или лучше в других лабораториях сдавать этот анализ, чтобы получить привычный количественный результат?

[MapaT]

Сохатый

А я думал мы вас потеряли..)

По поводу количественного анализа, похоже, что вам его выполнили без разведения сыворотки. Т.е аппарат считает до 250 первоначально, затем сыворотку разводят автоматически, либо в ручную и "считают" пока не выйдет реальное число. В данной лаборатории решили не заморачиваться, судя по всему..
Рекомендую сдавать этот анализ в лаборатории Инвитро, т.к предпочтительно использование таких анализаторов как Abbott ARCHITECT или Elecsys. Оба они прошли исследования и результаты наиболее сопоставимы (диапазон измерений от 0,05 МЕ/мл)

Количественное определения HBsAg - полезны инструмент в плане определения транскрипционной активности генома HBV. Например, уровни менее 100 указывают на низкий риск реактивации и шансы на спонтанный клиренс выше. Ну и конечно необходим в качестве оценки эффективности терапии IFN.

Другое дело, в вашем конкретном случае это не особо важно, т.к вы не на терапии. Чисто из интереса (для того и сдавали, как я понял).

[Сохатый]

Приветствую, МараТ!
Спасибо за наводку в Инвитро. Буду там делать этот анализ в будущем.

Насчет транскрипционной активности: количество HbsAg - это действительно полезный показатель, но картина смазывается тем, что этот антиген продуцируется и через эписомальные кольцевые HBV ДНК (через формирование соответствующей данному белку информационной РНК и далее через механизм трансляции), и через встроенные фрагменты вируса в геном клетки. Причем, как показывают исследования японцев, в случае интегральной стадии гепатита подавляющая часть HBsAg продуцируется именно из этих встроенных в ДНК клетки гепатоцита фрагментов ДНК вируса. Т.е. если чисто гипотетически допустить, что в результате, например, ПВТ вы свели в ноль репродукцию вируса на основе cccDNA или даже полностью уничтожили кольцевую ДНК в клетках (ну, мало ли!) – все равно гепатоцит, даже очищенный от кольцевой ДНК вируса, будет исправно клепать HbsAg через интегрированные в геном гепатоцита фрагменты вируса, причем в большом количестве.

Где-то читал, что гепатоциты – это настолько высокоспециализированные клетки в нашем организме, что их самовоспроизведение посредством митоза невозможно (из-за умножения собственного хромосомного набора в зрелом возрасте) и их количество поддерживается исключительно из резервуара стволовых клеток в определенном кластере эндотелия центральной вены. Каков цикл жизни гепатоцита? Год, два? Только через это время кровь полностью очистится от HbsAg в нашем (гипотетическом) случае, хотя ДНК вируса (cccDNA HBV) давно уже в клетке нет. Конечно, всё сказанное справедливо только для интегральной стадии гепатита.

Но, в общем-то, справедливо, то что при прочих равных условиях падение в динамике уровня концентрации HbsAg – это безусловно хорошо, имея ввиду репродукционную активность вируса, но всегда нужно иметь ввиду, что связь с репродукцией здесь непрямая из-за наличия балластного значения уровня HBsAg, связанного с интеграцией вируса.

[MapaT]

Сохатый
Действительно, все так и есть. 90% HBsAg у HBeAg-негативных происходит изолированно из интегрированной последовательности ДНК. По видимому, такие клетки не иммуногенны, и потому их устранение представляется практически не возможной задачей.. Дельта кстати может использовать и этот резервуар для сборки своих частиц.

Насчёт самовоспроизведения гепатоцитов - до сих пор продолжаются споры, на сколько я помню. Принято считать, что время жизни гепатоцита от 200 до 400 дней. Здесь актуальный вопрос, учитывая то, что HBV способен "персистировать" пожизненно: передаётся ли вирусная последовательность ДНК от гепатоцитов предшественников на новые в процессе созревания ? Где то в исследованиях читал, что этот процесс разрушает саму cccDNA со временем, но относится ли это к "интегральным" клеткам ?

По видимому, HBsAg так же способен ингибировать специфический иммунитет против HBV (и такие данные имеются)...

[Сохатый]

Действительно, все так и есть. 90% HBsAg у HBeAg-негативных происходит изолированно из интегрированной последовательности ДНК. По видимому, такие клетки не иммуногенны, и потому их устранение представляется практически не возможной задачей.. <...>

Ну почему же невозможной задачей?
Конечно, анализировать нативность всей ДНК задача неподъемная для иммунной системы, но ведь это и не нужно. Когда вирус проникает в клетку, содержимое капсида попадает в цитоплазму, но сам поверхностный антиген остается на поверхности мембраны. Остается там навсегда. Т.е. пораженный гепатоцит имеет совершенно определенный маркёр на своей поверхности в виде чужеродного белка, который отличает его от здоровой клетки (снаружи, заметь, отличает). Нужно только научить Т-хелперы помечать данные клетки в качестве мишеней для Т-киллеров и прочих элементов иммунной защиты. Я понимаю, что это легко сказать – «только научить». Но речь о том, что чисто теоретически такой механизм запустить можно, и поэтому я бы не стал говорить о «практически невозможной задаче». (Понятно, что такой иммунный механизм будучи запущен убьет все пораженные клетки без разбора – и с интегрированными в геном клетки участками вируса и без оных. Но, собственно, нам-то это без разницы – пусть бы они все пошли под нож иммунной защиты.)

[MapaT]

Да, правильнее было написать - сложной задачей..)

[Сохатый]

<...>По видимому, HBsAg так же способен ингибировать специфический иммунитет против HBV (и такие данные имеются)...

Когда боевая часть баллистичечской ракеты Сармат разделяется на управляемые боевые блоки, они летят в облаке ложных целей. Это большое количество ложных целей серьезно осложняет противодействие со стороны ПРО.

Применительно к гепатиту эта аналогия работает следующим образом: боевые блоки - это вирионы гепатита B, ложные цели - это "пустые" сферические и нитевидные частицы HBsAg, лишенные капсида. ПРО - это иммунитет. Большое количество ложных целей (а соотношение количества частиц Дейна к "пустым" частицам HBsAg обычно 1:1000 и более) в случае хронизации делает малоэффективной иммунную реакцию организма. Боевые блоки поражают свои цели...

P.S. МараТ, неплохая динамика основных показателей на ПВТ в вашей сигнатуре. Удачи вам. Будь здрав, боярин. =)

[MapaT]

Кажется вполне логичным.

Есть еще:

IL-12, в качестве иммунорегуляторного цитокина, способствуют развитию клеточного иммунного ответа, активируя Т-киллеры, обеспечивая врожденный и адаптивный иммунитет. ( 20 - 23 ). Моноциты производства IL-12 также способствуют Т - клеточной пролиферации и производству IFN-gamma, повышению генерации цитотоксических Т - лимфоцитов и клеток - киллеров ( 24 - 26 ), все они имеют важное значение для устранения внутриклеточной вирусной инфекции. Однако несколько вирусов, включая ВИЧ и вирус кори, препятствуют развитию клеточного иммунного ответа путем ингибирования продукции IL-12 ( 27 , 28). Это подавление может представлять собой важный механизм уклонения от иммунных ответов хозяина. Также считается, что отсутствие специфического для HBV ответа является одним из важных факторов при установлении стойкой хронической инфекции HBV ( 29 ). В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что HBsAg селективно ингибирует продукцию IL-12 в ответ на стимуляцию Pam3csk4, что было вызвано вмешательством в путь JNK-MAPK. Наши результаты могут помочь объяснить ослабленный иммунный ответ , наблюдаемый у пациентов с ХГБ.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23585678

HBsAg может регулировать продукцию IFN-гамма путем ингибирования продуцирования IL-18 и IL-12.
( https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15963597 )
Поверхностный антиген вируса гепатита В нарушает функцию миелоидных дендритных клеток: возможный механизм иммунного ускользания вируса гепатита В.
( https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18624732 )

МараТ, неплохая динамика основных показателей на ПВТ в вашей сигнатуре. Удачи вам. Будь здрав, боярин. =)

Спасибо. Стараемся

[Сохатый]

Хмм, интересная информация...
Не знал, что HBsAg может влиять на наши системы иммунной защиты на биохимическом уровне.

[Pacha33]

HBsAg может регулировать продукцию IFN-гамма путем ингибирования продуцирования IL-18 и IL-
А можно перевести на русский именно эту фразу?

[MapaT]

А можно перевести на русский именно эту фразу?

Боюсь, что на "русский" не получится.

Более понятно и не заморачиваясь деталями описал Сохатый выше.

[Сохатый]

MaрaTу В продолжении затронутой выше темы о натравливании иммунных Т-клеток на пораженные гепатоциты.

Фигасе! Оказывается такие технологии уже не только разработаны, но и работают на коммерческой основе, начиная с прошлого года! Имеются в виду уже допущенные министерством здравоохранения США (FDA) препараты Kymriah и Yescarta. Последний препарат, кстати, от небезызвестной нам компании Gilead Sciences. Правда, это новости из других областей, конкретно - из онкологии. Таким образом уже сейчас лечат некоторые виды лимфом и лейкемию, добиваясь в большинстве случаев (до 80% и более) стойкой ремиссии, а иногда и полного излечения.

В чём же суть этого нового (и даже где-то революционного) метода? У пациентов осуществляют экстракцию иммунных Т-клеток из периферической крови (посредством лейкофереза). Затем эти клетки подвергаются генетической модификации. В них монтируют с помощью безвредного вирусного вектора химерный антиген рецепторов, облегчающий распознавание раковых клеток. Затем генно-модифицированные Т-клетки вводятся обратно в кровь пациента. Эти модифицированные клетки целенаправленно атакуют раковые В-лимфоциты, которые они распознают по специальному маркёру, расположенному на их поверхности. Такая технология называется CAR-T-клеточная терапия. Данная терапия для многих онкобольных с заболеваниями крови является той самой волшебной «синей таблеткой», да к тому же еще и одноразовой (требуется всего одна инъекция).

Здесь важно не то, что теперь можно лечить (ну или переводить в разряд хронических) онкологические заболевания, ранее считавшимися неизлечимыми. А, скорее, важно открытие и отработка совершенно новой и универсальной технологии тонкой целенаправленной настройки иммунитета против пораженных клеток, несущих на своей поверхности определенный белковый маркёр. Почему бы эту технологию не обратить против гепатита В? Ведь на поверхности мембраны пораженных гепатоцитов тоже имеется вполне определенный маркёр – белок HbsAg, внедрившегося когда-то вириона вируса в клетку. Его капсид с геномом проник в цитоплазму, а вот поверхностный антиген остался на поверхности гепатоцита на постоянной основе. Это же прекрасная цель для Т-клеток!
Я полагаю, что специалисты в Gilead тоже давно думают в эту сторону вместе со мной.

Однако, есть у этого метода как минимум два хреновых момента. Первое - это «цитокиновый шторм». Цитокины, освобождающиеся в результате атаки Т-клеток, попадают в кровоток и атакуют центральную нервную систему, что примерно в 10% случаев приводит к различным осложнениям (вплоть до тяжелых случаев энцефалопатии). Второе – это стоимость. Пиявочки эти, как пел Дуремар, не просто дорогие, а весьма дорогие. Стоимость лечения сейчас превышает $400 000, что всё равно дешевле, чем пересадка костного мозга (правда, если лечение не результативно, а это около 20%, – деньги возвращают). Но, как говорится, лиха беда начало!

https://nplus1.ru/news/2017/08/31/Kymriah-approved - вот вкратце эта новость на русском.

[MapaT]

Сохатый
Да, я слышал об этом. Иммунотерапия рака - новый метод лечения и довольно эффективный, даже на продвинутых стадиях. А Гилеад наверняка скупила очередной стартап для реализации.. )

[MapaT]

Сохатый
Кстати, откуда у вас информация, что антиген остается на внешней стороне мембраны после прикрепления и слияния с клеткой ?

Я просто хочу получить больше информации из каких либо источников (надеюсь). Ведь сам механизм слияния вирусных частиц с клеткой еще довольно плохо изучен, на сколько я помню. Или у вас есть более актуальные данные ?

[Сохатый]

Сто пудов эту технологию в скором времени адаптируют под гепатит В. Вот только вряд ли она когда-то будет дешевой, поскольку "лекарство" нужно формировать всякий раз индивидуально для различных пациентов.

По части того, что поверхностный антиген остается на мембране клетки, читал в свое время в какой-то научной статье, посвященной механизмам проникновения вируса HBV в клетку. Закину ссылку, как только еще раз столкнусь с этой информацией.