Часть 2. Тест-системы и наборы CMD и их пресловутая чувствительность 10 МЕ/мл.
На ресурсе http://www.interlabservice.ru размещена статья под названием «Разработка тест-системы для одновременного выявления РНК ВИЧ и вируса гепатита С (HCV) и ДНК вируса гепатита В (HBV) в образцах донорской крови». Т.е. речь идет о мультиплексе с качественным определением HCV/HBV/HIV.
Авторы: Богословская Е.В., Цыганова Г.М., Зайцев В.В., Шипулин Г.А.
Источник: ФГУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва, Россия
В заключение статьи сказано, что «На базе ФГУН ЦНИИЭ разработана тест-система на основе метода Real-Time ПЦР, позволяющая одновременно выявлять нуклеиновые кислоты ВИЧ, HCV и HBV с чувствительностью 50 копий РНК/мл (для ВИЧ), 10 МЕ/мл (для HCV) и 20 копий ДНК/мл (для HBV)». Полная версия статьи - http://www.interlabservice.ru/consulting/publications.php?id=8190
Т.е. получается, что тест-система с чувствительностью 10 МЕ/мл и впрямь является разработкой РФ, а именно ФБУН ЦНИИ.
Давайте более подробно посмотрим что собой предстяавляет данная система или набор.
Заходим в корневой каталог ресурса http://www.interlabservice.ru и далее идём в секцию «О КОМПАНИИ» и смотрим раздел «Наши партнеры», где дословно сказано следующее: «ООО «ИнтерЛабСервис» является официальным дистрибьютором наборов реагентов для ПЦР-диагностики торговой марки АмплиСенс производства ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора».
Здесь стоит вернуться ненадолго к первому вопросу и посмотреть, кому принадлежит ООО «ИнтерЛабСервис» (далее ИЛС).
- 1. 33.3% в ИЛС принадлежат ООО «МБК» - всё тому же МБК, которое на 60% принадлежит г-ну МАРКЕЛОВУ Михаилу Леонидовичу. Таким образом, эффективная доля г-на Маркелова в ИЛС составляет 33.3% x 60% = 20%
2. 39.42% в ИЛС принадлежиат КОЖЕВНИКОВОЙ Галине Михайловне - доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой инфекционных болезней с курсом эпидемиологии ФГО ВПО Российский университета дружбы народов (РУДН), в 1978 г. окончила тот же самый лечебный факультет Московского медицинского стоматологического института , что и Вадим Валентинович Покровский (Заместитель директора института по научной работе ФБУН ЦНИИ, сын Директора ФБУН ЦНИИ Покровского В.В.). Подробно биография - http://web-local.rudn.ru/web-local/prep/rj/?id=3021&mod=personal
http://web-local.rudn.ru/web-local/prep/rj/index.php?id=3021
3. 13.64% в ИЛС принадлежит Каламбету Юрию Анатольевичу, к.ф.-м.н., МФТИ, Институт Молекулярной Генетики, Генеральный директор ЗАО "Амперсенд" (занимается автоматзацией хроматографии).
4. 6.82% в ИЛС принадлежит ГУЩИНУ Александру Евгеньевичу - к.б.н., старший научный сотрудник Федерального научно-методического центра Минздрава России по профилактике и борьбе со СПИД на базе Центрального НИИ Эпидемиологии, руководитель лаборатории молекулярной диагностики и эпидемиологии инфекций органов репродукции ФБУН Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора (ФБУН ЦНИИ).
5. 6.82% в ИЛС принадлежит ГУЩИНОЙ Ирине Андреевне – Генеральный директор ИЛС, супруга ГУЩИНА Александра Евгеньевича - http://www.interlabservice.ru/about/contacts.php?print=Y
Т.е. основной контроль (около 60%) в ООО «ИнтерЛабСервис» (ИЛС) принадлежит г-ну Маркелову М.Л. через ООО «МБК» и г-же КОЖЕВНИКОВОЙ Г. М. Остальные (около 40%) принадлежат Калабету Ю.А. (13.64%), супругам Гущиным (суммарно 13.65%) и оставшиеся 10% принадлежат г-же ПИКАЛЮК Д. Л. через её долю в ООО «МБК».
Таким образом, мы выяснили, что подразумевается под «базой» или «сетью» CMD и кому они принадлежат.
Вернемся непосредственно к тест-системам или наборам, которые производит ФБУН ЦНИИ, далее распространяет ООО «ИнтерЛабСервис» и которые затем используются для диагностики Гепатита C и пр. Инфекционных заболеваний сетью лабораторий CMD.
И так, как уже было сказано выше ФБУН ЦНИИ производит наборы реагентов под торговой маркой «АмплиСенс». Заходим на сайт ИЛС, раздел «Каталог», «Наборы реагентов», «АмплиСенс для ПЦР-диагностики инфекционных болезней человека» и далее выбираем «Вирус гепатита С». Конечная ссылка на каталог: http://www.interlabservice.ru/catalog/reagents/index.php?sid=1416
Далее нас интересуют два набора:
- 1. ПЦР Качество – Набор реагентов для выявления РНК вируса гепатита C (HCV) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® HCV-FL.
http://www.interlabservice.ru/catalog/reagents/index.php?sid=1416&id=5993
Смотрим подробную инструкцию к данному тесту - http://www.interlabservice.ru/upload/iblock/d8f/R-V1-ModvRG,iQ,Mx,Dtc.HCV-FL.MANUAL.110512.pdf
На стр. 6 приведена таблица «Аналитическая чувствительность». Т.е. чтобы аналитическая чувствительность была 10 МЕ/мл (та которая заявлена CMD - http://www.cmd-online.ru/patients/cat/detail.php?ELEMENT_ID=204321), должно соблюдаться несколько условий – (1) флуоресцентная детекция в режиме «реального времени» - FRT, (2) экстракция РНК для анализа должна проводиться из не менее чем 1000 мкл плазмы крови, (3) должны использоваться определённые комплекты экстракции РНК/ДНК – пакет «МАГНО-сорб» и «NucliSENS easyMAG». Более подробно читайте в инструкции.
Если кратко, то весь процесс выглядет следующим образом – пулирование образцов, подготовка проб (выделение из образца РНК/ДНК), амплификация и расшифровка результатов. По этой ссылке можно ознакомиться с презентацией по тестированиюу реагентов АмплиСенс. Стр. 22-23 описывают процесс анализа. http://md2010.org/files/presents/s18/c18-6.pdf
Также можно ознкомиться с презентацие 2015 г., подготовленной ИЛС. Подробный процесс описан на слайде 6. http://transfusion.ru/2015/05-18-1-9.pdf
Как видно из приведенных выше презентаций применение реагентов АмплиСенс производится на этапе между выделением РНК/ДНК и непосредственно процессом амплификации.
После экстракции РНК необходимо провести реакцию ПЦР на определенном амплификаторе, рекомендованном ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора в «методических рекомендациях по применению набора реагентов АмплиСенс® HCV-FL». Согласно методическим рекомендациям, такими амплификаторами являются:
- 1. Rotor-Gene 3000 (два и более каналов), Rotor-Gene 6000 (пятиканальный, шестиканальный) (Corbett Research, Австралия);
2. Rotor-Gene Q (пятиканальный, шестиканальный) (QIAGEN, Германия);
3. iCycler iQ5 (Bio-Rad, США);
4. СFX96 (Bio-Rad, США)
5. Mx3000P (Stratagene, США);
6. «ДТ-96» («ДНК-Технология», Россия).
Подробно в инструкции и методичеких рекомендациях здесь -http://www.interlabservice.ru/upload/iblock/11c/hcv_fl_-hgv_fl_-hdv_fl_-hbv_fl-_metodicheskie-rekomendatsii-frt_-161215.pdf
Также можно посмотреть регистрационные данные по данному набору регентов: http://www.interlabservice.ru/upload/iblock/bab/fsr2011_10235.pdf
Как видно, данный набр был зарегистрирован в РФ в 2012 г. и с тех пор применяется CMD и прочими диагностическим центрами.
- 2. ПЦР Количество – Набор реагентов для количественного определения РНК вируса гепатита C (HCV) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме "реального времени" "АмплиСенс HCV-Монитор-FL".
http://www.interlabservice.ru/catalog/reagents/index.php?sid=1416&id=5993
Смотрим подробную инструкцию к данному тесту - http://www.interlabservice.ru/upload/iblock/a8e/HCV-M-FL.MANUAL.240613.pdf
На стр. 5 приведена таблица «Аналитические характеристики». Как видно из таблицы, если объем экстракции такой же, как и в случае с качественным тестом и составляет 1000 мкл и при это используются комплекты МАГНО-сорб и NucliSENS easyMAG, то чувствительность количественного теста должна быть 30 МЕ/мл. Вопрос – почему заявленная чувствительность CMD составляет 300 МЕ/мл, а не 30? – http://www.cmd-online.ru/patients/cat/detail.php?ELEMENT_ID=204322
Чувствительность в 300 МЕ/мл соответствует объему экстракции в 100 мкл и комплекту для экстракции из РИБО-сорб-12 / РИБО-преп и NucliSENS easyMAG. По каким-то причинам CMD видимо использует именно эти комплекты, а не более чувствительные - 30 МЕ/мл. При этом все наборы доступны для приобретения, согласно прайс-листу на 1кв2016 - http://www.interlabservice.ru/price/files/Catalog_osnovnoy_1kv_2016.pdf
Как мы видим, секрет сверхчувствительных тестов CMD заключается в наборах реагентов АмлиСенс, которые производятся ФБУН ЦНИИ и затем распространются ООО «ИЛС». Т.е. вся технологическая цепь процесса состоит из зарубежного оборудования (за исключением возможного применения российского амплификатора «ДТ-96» («ДНК-Технология», Россия)) и российских реагентов АмплиСенс.
Здесь же стоит отметитть, что ООО «ИЛС» поставляет реактивы произведенные ФБУН ЦНИИ в большинсвто государственных учреждений РФ, включая больницы, СПИД-центры и прочие заведения, которые имеют в распоряжении соответсвующее диагностическое оборудование. Это очень отчетливо видно, если посмотрть на сайте гос-закупок контракты ТОО «ИЛС». Например, одной из компаний закупающих реактивы у ИЛС, является Питрерский диагностический центр расположенный на территории болницы им. Боткина - СПб ГБУЗ ГКДЦ (вирусологический) - http://www.viruscenter.ru/
Вот ответ данного центра по поводу используемых тест-систем:
“Количественный тест (вирусная нагрузка) - АмплиСенс HCV-Монитор-FL, качественный с чувствительностью 10 МЕ/мл - АмплиСенс HCV-FL”.
Вот только непонятно из ответа какая какая у них чувствительность у количественного теста.
Таким образом СПб ГБУЗ ГКДЦ (вирусологический) является по сути тем же самом CMD в Питере.
Ну и в заключении приведу для сравнения ответы от Инвитр и КДЛ.
Инвитро – «В нашей лаборатории для определения РНК вируса гепатита С ( качественный) используется метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени на анализаторе ПЦР-детектор CFX-96, ООО Bio-Rad (США), с применением реактивов производства ЗАО «Вектор-Бест» (Россия), имеющих регистрационные удостоверения Росздравнадзора, производство их сертифицировано по ISO 13485 и ISO 9001. Чувствительность определения – 60 МЕ/мл.»
КДЛ – «Исследование РНК вируса гепатита С в нашей лаборатории проводится методом ПЦР RealTime. Используемое оборудование: KingFisher с магнитной головой для 96-лун. ПЦР планшетов, прибор ПЦР в реальном времени CFX-96 (производитель Bio-Rad Laboratories, Inc. (США)). Чувствительность тестов для определения РНК вируса гепатита С - 15 МЕ/мл. Тест-системы: набор РеалБест ВГС ПЦР (Вектор-Бест)».
Гемотест – ответ был получен по телефону. Они также используют рекативы Вектор-Бест.
Т.е. все прочие известные частные лаборатории используют рекативы ЗАО «Вектор-Бест».
2136
Лабы - тест-наборы и чувствительность
Теперь есть общее представление о актуальной структуре со ссылками. Если кому то хватит терпения осилить могут появляться более осмысленные вопросы.
